ЯРОСЛАВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ
Кафедра акушерства и гинекологии
Факультет повышения квалификации и профессиональной подготовки специалистов здравоохранения
Пренатальная диагностика
Пособие для врачей и интернов
Ярославль 2004
Авторы: доцент,
к.м.н. А. Р. Слепцов, профессор, д.м.н. M. Б. Охапкин, доцент, к.м.н. М. В. Хитров (кафедра акушерства и гинекологии Ярославской Государственной медицинской академии – зав.
каф. профессор М. Б. Охапкин).
Методическое пособие рекомендовано Методическим советом по последипломному образованию Ярославской Государственной медицинской академии.
Утверждено центрально-координационным советом академии. Рекомендовано Правлением Ярославской ассоциации акушеров-гинекологов.
Общие замечания:
На долю генных нарушений приходится в общей сложности до 5% всей врожденной патологии.
Более половины случаев моногенной патологии, требующей пренатальной диагностики, составляют такие сравнительно частые и тяжелые болезни, как муковисцидоз, миодистрофия Дюшена, синдром ломкой X-хромосомы, гемофилия А, фенилкетонурия, поликистоз легких, атаксия Фридрейха, синдром Верднига-Гоффмана и синдром Шарко-Мари-Тус.
Молекулярная (ДНК) диагностика проводится на уровне отдельных генов, и даже на уровне фрагментов ДНК самих генов или близлежащих ДНК-последовательностей.
Преимущества молекулярной диагностики:
универсальность, возможность использовать для анализа любые ДНК-содержащие клетки организма;
возможность проведения анализа на любой стадии онтогенеза, начиная со стадии зиготы;
Оптимальный срок для пренатальной диагностики молекулярными методами — I триместр беременности, что требует детального ДНК-анализа семьи еще до её наступления.
Материал для анализа
обследование семей высокого риска и больных в случае генных болезней: муковисцидоз,
фенилкетонурия, проводят с использованием пятен крови, нанесенных на фильтрованную бумагу, что значительно облегчает транспортировку и хранение образцов из удаленных от диагностических центров районов;
для некоторых других генных болезней: гемофилия А, миодистрофия Дюшена, диагностика проводится на чистых препаратах ДНК, выделенных из крови плода, клетки которого получают при помощи стандартных инвазивных методов.
Основа ДНК-диагностики — полимеразная цепная реакция синтеза ДНК (ПЦР). Метод позволяет избирательно умножать число (аплифицировать) относительно небольших участков ДНК,
длиной от нескольких десятков до нескольких тысяч пар нуклеотидов, используя в качестве матрицы любые образцы ДНК, содержащие необходимую последовательность пар нуклеотидов.
Прямая диагностика основана на непосредственной идентификации мутаций в определенном гене. Достоверность молекулярной диагностики прямым методом очень высока и приближается к абсолютной.
Косвенная (непрямая) диагностика основана на маркировке мутантного гена (больной хромосомы) с помощью молекулярных маркеров. Частота ошибочного диагноза может достигать 2%.
Сочетание ДНК-диагностики с другими методиками:
в случае гемофилии А возможно прямое определение уровня фактора VIII свертывания крови в пуповинной крови плода после 20 недель беременности;
при адреногенитальном синдроме — прямое исследование содержания 17-ОН прогестерона в амниотической жидкости;
диагностика ломкой Х-хромосомы дополняется анализом культуры лимфоцитов пуповинной крови плода;
в случае муковисцидоза дополнительная информация о состоянии плода может быть получена при биохимическом исследовании активности ферментов АЖ в 17-19 недель беременности.